■ 基本信息
別名: | pET16b |
啟動(dòng)子: | T7 |
復(fù)制子: | pBR322 |
終止子: | T7 terminator |
質(zhì)粒分類(lèi): | 大腸系列質(zhì)粒；大腸表達(dá)質(zhì)粒；pET系列質(zhì)粒 |
質(zhì)粒大小: | 5711bp |
質(zhì)粒標(biāo)簽: | N-His, N-Factor Xa |
原核抗性: | Amp |
克隆菌株: | DH5a |
培養(yǎng)條件: | 37℃，有氧，LB |
表達(dá)宿主: | BL21(DE3)等大腸桿菌 |
誘導(dǎo)方式: | IPTG或乳糖及其類(lèi)似物 |
5'測(cè)序引物: | T7：TAATACGACTCACTATAGGG |
3'測(cè)序引物: | T7-ter：TGCTAGTTATTGCTCAGCGG |
■ 質(zhì)粒屬性
質(zhì)粒宿主: | 大腸桿菌 |
質(zhì)粒用途: | 蛋白表達(dá) |
片段類(lèi)型: | 基因CDS
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片段物種: | 空載體
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原核抗性: | Amp |
真核抗性: |
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熒光標(biāo)記: |
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■ 質(zhì)粒簡(jiǎn)介
pET-16b質(zhì)粒是一種原核表達(dá)載體，N端含有一個(gè)10×His標(biāo)簽、Factor Xa酶切位點(diǎn)和BamHI限制性?xún)?nèi)切酶位點(diǎn)。表達(dá)由宿主細(xì)胞提供的T7 RNA聚合酶誘導(dǎo)，目的基因被克隆到質(zhì)粒載體上，受噬菌體強(qiáng)轉(zhuǎn)錄及翻譯信號(hào)控制。
pET系統(tǒng)是有史以來(lái)在大腸桿菌中表達(dá)重組蛋白的功能最強(qiáng)大的系統(tǒng)，也是現(xiàn)今原核表達(dá)方面使用最廣泛的系統(tǒng)。該系列質(zhì)粒能很容易的通過(guò)降低誘導(dǎo)物的濃度來(lái)削弱蛋白表達(dá)。在非誘導(dǎo)條件下，可以使目的基因處于完全沉默狀態(tài)而不轉(zhuǎn)錄。
The pET-16b vector carries an N-terminal His?Tag? sequence followed by a Factor Xa site and three cloning sites. Unique sites are shown on the circle map. Note that the sequence is numbered by the pBR322 convention, so the T7 expression region is reversed on the circular map. The cloning/expression region of the coding strand transcribed by T7 RNA polymerase is shown below.質(zhì)粒只保證關(guān)鍵序列正確，不保證表達(dá)效果。
■ 質(zhì)粒圖譜
■ 質(zhì)粒序列
質(zhì)粒序列請(qǐng)下載：
ZK147pET-16b大腸表達(dá)質(zhì)粒.txt
